黄芪的薄层色谱荧光鉴别


为了提高中药制剂的开发和质量控制水平,制剂中的每种药物都应有高度特异性的鉴别方法。黄芪甲苷是黄芪的特征成分,因此黄芪甲苷的薄层鉴定已成为黄芪及其制剂的代表。 1995年版、2000年版《中国药典》也已正式合法化。迄今为止,科研报告、新药开发、医院制剂中也采用此方法。但在实际工作中,我们发现该方法更适合鉴定药味不大的单味或复方制剂中的黄芪。当用于药味较多的制剂时,则存在明显的不足,表现为:黄芪甲苷IV浓度极高。正相薄层色谱中的Rf值较小,出现在斑点密集区域,难以与相邻组分分离;为了使斑点可见,点样量一般应达到拖尾,而拖尾却严重影响斑点的识别;制剂中除黄芪以外的药味造成很大的背景干扰,特别是阴性对照物常在该位置出现斑点,干扰结果的正确判断。

通过大量的实验,我们发现了由两个相对固定的荧光点组成的薄层色谱。利用该色谱图鉴定黄芪及含黄芪的复方制剂时,几乎不受其他药物的干扰,也不受大量样品的影响。由此产生的样品拖尾干扰更适合黄芪及相关制剂的鉴定。

1. 实验材料

1.1 对照药材内蒙古黄芪(购自中国药品生物制品检定所)。

1.2 原料药黄芪(购自山西省太原市,为黄芪冻干品,产于山西,经鉴定为内蒙古黄芪(Fisch.)bge.var.mongholicus(Bge.)本所首席中药师于明霞所著的《萧》膜A.membrancus(南京中医药大学中康公司中药指纹图谱实验室提供)。

1.3制剂宫血颗粒(我院制剂室生产,处方包括熟地、阿胶、女贞子、枸杞子、黄芪等11味中药);中汇糖脉康颗粒(中汇药业公司,批号200322,处方中有黄芪、熟地、丹参、牛膝、麦冬、黄精等药物);补中益气口服液(湖州三九制药有限公司,批号990812,处方包括黄芪、党参、甘草、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮)。

1.4 试剂正丁醇、碳酸氢钠、无水硫酸钠(CR级)。

1.5薄层板硅胶G预制板(青岛海洋化工厂)。

1.6仪器254nm紫外灯。

2 实验方法

2.1 内蒙古黄芪及黄芪的荧光光谱

取内蒙古黄芪、带膜黄芪各2 g,加水50 mL,回流提取1 小时,过滤,滤液用水饱和正丁醇(35 mL3)提取,合并取对照药材3 份提取物,用5% 碳酸氢钠溶液(20 mL2)洗涤,继续用水(20 mL)洗涤取对照药材2 g,按照上述方法制备对照药材溶液。各取5 L将上述溶液分别置于同一块硅胶G薄层板上,下层用甲醇-氯仿-水(15:65:5)为展开剂,向上展开,取出,干燥,置于UV254 nm紫外光下检查,供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,有两个相同的蓝色荧光斑点。 Rf值0.35较大且较亮,Rf值0.76大的斑点较小;黄芪中这两个斑点的情况恰恰相反。如果在365nm下观察,上述荧光斑点仍然存在,但背景荧光较强,斑点不清晰。

2.2 制剂中黄芪的荧光色谱图

称取宫血颗粒10g、中会糖脉颗粒10g,用热水溶解,过滤。另取补中益气口服液30mL,按2.1方法配制各制剂供试品溶液。称取除黄芪外的上述各制剂中的药味,制备其阴性对照物质,并用组合法制备阴性对照溶液。分别吸取各制剂的供试品溶液。将本制剂的阴性对照液与黄芪对照液点样于同一块硅胶G预制板上,按2.1中方法展开,在UV254 nm紫外灯下检查。各制剂供试品色谱中,在与黄芪对照品色谱相应的位置上,有两个相同的蓝色荧光斑点,其阴性对照品对此无干扰。从色谱结果可以确定,制剂中的黄芪均为内蒙古黄芪。

3。结果与讨论

3.1 黄芪的两个荧光斑点中,内蒙古黄芪的荧光斑点Rf值较小,斑点较大且较亮。黄芪中的则恰恰相反。两个点的Rf值和距离适中,周围没有任何区域。其他干扰点构成了黄芪独特且相对固定的色谱图。

3.2 黄芪荧光斑点清晰、干扰小,是因为正丁醇提取了样品的中等极性部分;正丁醇提取液用5%碳酸氢钠洗涤,除去大量酚羟基。成分,如类黄酮和其他酚类干扰物质;然后通过特定的显色剂显色分离;在254nm紫外光下观察,薄层色谱板上原本存在的许多其他物质在此波长下不发荧光,一般不影响黄芪的性质。对于荧光点观察,即使点样量较大,拖尾严重,不会干扰荧光斑点的观察。因此,该谱图具有良好的重现性和特异性,可以对结果做出明确的判断;在365nm处,由于荧光物质过多,无法将黄芪与其他干扰物质区分开来,不适合本品的观察。

3.3 该方法强调性好,特异性强。若用于鉴定黄芪及其制剂的性状,可提高中药制剂的质量控制水平。

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