黄芪的薄层色谱荧光鉴别

为了提高中药制剂的开发和质量控制水平，制剂中的每种药物都应有高度特异性的鉴别方法。黄芪甲苷是黄芪的特征成分，因此黄芪甲苷的薄层鉴定已成为黄芪及其制剂的代表。 1995年版、2000年版《中国药典》也已正式合法化。迄今为止，科研报告、新药开发、医院制剂中也采用此方法。但在实际工作中，我们发现该方法更适合鉴定药味不大的单味或复方制剂中的黄芪。当用于药味较多的制剂时，则存在明显的不足，表现为：黄芪甲苷IV浓度极高。正相薄层色谱中的Rf值较小，出现在斑点密集区域，难以与相邻组分分离；为了使斑点可见，点样量一般应达到拖尾，而拖尾却严重影响斑点的识别；制剂中除黄芪以外的药味造成很大的背景干扰，特别是阴性对照物常在该位置出现斑点，干扰结果的正确判断。

通过大量的实验，我们发现了由两个相对固定的荧光点组成的薄层色谱。利用该色谱图鉴定黄芪及含黄芪的复方制剂时，几乎不受其他药物的干扰，也不受大量样品的影响。由此产生的样品拖尾干扰更适合黄芪及相关制剂的鉴定。

1. 实验材料

1.1 对照药材内蒙古黄芪(购自中国药品生物制品检定所)。

1.2 原料药黄芪（购自山西省太原市，为黄芪冻干品，产于山西，经鉴定为内蒙古黄芪（Fisch.）bge.var.mongholicus（Bge.）本所首席中药师于明霞所著的《萧》膜A.membrancus（南京中医药大学中康公司中药指纹图谱实验室提供）。

1.3制剂宫血颗粒（我院制剂室生产，处方包括熟地、阿胶、女贞子、枸杞子、黄芪等11味中药）；中汇糖脉康颗粒(中汇药业公司，批号200322，处方中有黄芪、熟地、丹参、牛膝、麦冬、黄精等药物)；补中益气口服液（湖州三九制药有限公司，批号990812，处方包括黄芪、党参、甘草、白术、当归、升麻、柴胡、陈皮）。

1.4 试剂正丁醇、碳酸氢钠、无水硫酸钠（CR级）。

1.5薄层板硅胶G预制板（青岛海洋化工厂）。

1.6仪器254nm紫外灯。

2 实验方法

2.1 内蒙古黄芪及黄芪的荧光光谱

取内蒙古黄芪、带膜黄芪各2 g，加水50 mL，回流提取1 小时，过滤，滤液用水饱和正丁醇（35 mL3）提取，合并取对照药材3 份提取物，用5% 碳酸氢钠溶液（20 mL2）洗涤，继续用水（20 mL）洗涤取对照药材2 g，按照上述方法制备对照药材溶液。各取5 L将上述溶液分别置于同一块硅胶G薄层板上，下层用甲醇-氯仿-水（15：65：5）为展开剂，向上展开，取出，干燥，置于UV254 nm紫外光下检查，供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，有两个相同的蓝色荧光斑点。 Rf值0.35较大且较亮，Rf值0.76大的斑点较小；黄芪中这两个斑点的情况恰恰相反。如果在365nm下观察，上述荧光斑点仍然存在，但背景荧光较强，斑点不清晰。

2.2 制剂中黄芪的荧光色谱图

称取宫血颗粒10g、中会糖脉颗粒10g，用热水溶解，过滤。另取补中益气口服液30mL，按2.1方法配制各制剂供试品溶液。称取除黄芪外的上述各制剂中的药味，制备其阴性对照物质，并用组合法制备阴性对照溶液。分别吸取各制剂的供试品溶液。将本制剂的阴性对照液与黄芪对照液点样于同一块硅胶G预制板上，按2.1中方法展开，在UV254 nm紫外灯下检查。各制剂供试品色谱中，在与黄芪对照品色谱相应的位置上，有两个相同的蓝色荧光斑点，其阴性对照品对此无干扰。从色谱结果可以确定，制剂中的黄芪均为内蒙古黄芪。

3。结果与讨论

3.1 黄芪的两个荧光斑点中，内蒙古黄芪的荧光斑点Rf值较小，斑点较大且较亮。黄芪中的则恰恰相反。两个点的Rf值和距离适中，周围没有任何区域。其他干扰点构成了黄芪独特且相对固定的色谱图。

3.2 黄芪荧光斑点清晰、干扰小，是因为正丁醇提取了样品的中等极性部分；正丁醇提取液用5%碳酸氢钠洗涤，除去大量酚羟基。成分，如类黄酮和其他酚类干扰物质；然后通过特定的显色剂显色分离；在254nm紫外光下观察，薄层色谱板上原本存在的许多其他物质在此波长下不发荧光，一般不影响黄芪的性质。对于荧光点观察，即使点样量较大，拖尾严重，不会干扰荧光斑点的观察。因此，该谱图具有良好的重现性和特异性，可以对结果做出明确的判断；在365nm处，由于荧光物质过多，无法将黄芪与其他干扰物质区分开来，不适合本品的观察。

3.3 该方法强调性好，特异性强。若用于鉴定黄芪及其制剂的性状，可提高中药制剂的质量控制水平。