秀珍菇液体菌种制备技术

一、工艺流程母种原种（液体摇瓶）生产种（罐发酵）棒接种

2. 母种的制备

一、母种培养基配方

马铃薯（去皮）20%、葡萄糖2%、琼脂2%、水1000毫升，pH值5.5-6。

二、母种的制备及注意事项

按配方准确称取原料，加热煮沸至最终体积，分装试管，装量约为试管长度的1/41/5，用棉塞塞住。使用高压灭菌器灭菌，温度121，压力0.11Mpa，半小时，一定要放掉高压灭菌器内的冷气。灭菌后，当培养基温度降至60时，将一对试管置于斜面上。小心不要让介质粘在棉塞上。

接种应严格按照无菌操作规程进行，然后置于25左右的恒温培养箱中培养1015天。

3. 原种制备

1.原培养基配方

马铃薯（去皮）20%、麦麸3%、葡萄糖2%、蛋白胨3、磷酸二氢钾2、硫酸镁1。二、原种的制备及注意事项

土豆去皮切片后，与麦麸一起煮20分钟，过滤至定容，加入其他原料，全部溶解，装入锥形瓶中。三角瓶除清洗外，使用前应进行灭菌处理，灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。每瓶放入5-10个玻璃球（直径0.5cm），用棉塞塞紧瓶口，用牛皮纸包好，扎紧。使用高压灭菌器在121的温度和0.11MPa的压力下灭菌45分钟。

冷却后进行无菌接种，然后置于25恒温培养箱中静置培养72小时。摇床培养时，温度25，转速140rpm，培养时间7296小时。

4、生产品种的准备

一、生产培养基配方

马铃薯（去皮）20%、麦麸2%、蛋白胨3、葡萄糖2%、磷酸二氢钾1、硫酸镁0.5、石膏0.5、琼脂2-3g、酵母膏0.5、消泡剂1。

2、生产品种的准备

(1)清洗水箱

发酵罐每次使用后必须彻底清洗，清除罐内残留菌球、菌块料液等杂物，确保罐内清洁。

(2)原料的准备根据生产介质的配方准确称取各种原料。土豆去皮切片，与麦麸一起煮20分钟，过滤至定容，加入其他原料和消泡剂。

(3)灭菌

将装满培养基的发酵罐推入灭菌室内，通蒸汽灭菌，控制温度121左右，压力0.11Mpa，灭菌1小时。

(4)冷却

培养基灭菌后，打开灭菌室，将发酵罐推入冷却室降温，待温度降至25时接种。

（五）接种

将发酵罐推到层流罩下，先用酒精喷灯对发酵罐的接种口进行消毒，然后迅速打开原种瓶用喷灯对瓶口进行消毒，打开接种口阀门，将菌种注入发酵罐，然后迅速关闭接种阀。

(6)恒温培养与观察

接种后将发酵罐推至培养区，连接通气阀等，通过进气阀调节通气量为1：0.5V/V1.2V/V（料液体积/空气体积）和排气阀。调整罐内压力保持在0.02Mpa0.04Mpa。培养温度控制在25左右。

接种24小时后，可每隔12小时从接种口取样，观察细菌的萌发和生长情况。用显微镜、低倍、高倍、油浸显微镜观察菌丝生长情况及有无细菌污染，发现异常及时处理。

接种培养袋经菌种恒温培养7天左右即可使用。液体生产种如不能立即使用，可在12-15下暂存2-3天。 （来源：福农网）