食用菌制种实用技术

随着食用菌产业的蓬勃发展，菌种需求量增加，但现有菌种生产单位数量明显偏少，不少食用菌种植户不得不从国外引进菌种。远距离采购和运输菌种，不仅成本高、成本高，而且菌种容易因破瓶造成细菌污染，严重影响种植食用菌的经济效益。如果食用菌种植者能够掌握菌种的生产程序和制种技术，进行制种自产，逐步发展成为专业制种户，也是一个很好的致富途径。菌种生产程序通常分为母种、原种和栽培种三个层次，通常称为一级、二级和三级菌株。其中，母种的分离繁育技术性强，需要精细化；而原种和栽培种的生产相对简单。下面介绍各级菌株的生产技术。雌性种的分离与繁育雌性种主要通过人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质体融合等方法获得。作为一般制种专业人士，可以采用人工选育的方式，对母种进行分离培育。具体步骤和操作方法如下。 1、种源采集从野生和人工栽培种群中选择具有代表性的优良菇体作为种源。种植蘑菇的标准是：8成熟，花形圆润直立，肉厚，无病虫害。采集符合上述标准的籽菇1--2个，编号作为分离母种的材料。从培养室采集的，应标明原菌种编码。 2、培养基制备琼脂培养基又称PDA培养基。常用配方为：土豆200-250克，琼脂15-20克，葡萄糖20-25克，水1000毫升。也可加入1-1.5克硫酸镁、少量维生素B1、2-3克磷酸二氢钾。先将土豆洗净去皮，切成薄片，放入铝锅中加水煮30分钟，捞起用4层纱布过滤取汁。然后在汁液中加入琼脂，边加热边搅拌，让琼脂充分溶解；再加入葡萄糖等，煮几分钟，用4层纱布过滤取汁。趁热将果汁倒入玻璃试管中。加至管长的1/5，用棉花塞紧管口，或将汁液倒入容量为20毫升的玻璃三角瓶中。然后放入高压锅中，在98--108 kPa/cm的压力下灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出，趁热将试管斜放在台面上，冷却后成为固体斜面培养基。 3.母种分离方法有3种方法：孢子喷射法、组织分离法和基底分离法。 孢子喷射法。种菇表面消毒吸水后，将菇体悬挂在盛有琼脂培养基的三角瓶中，让菇体内的袍子自然散落在培养基上，使菌丝萌发。也可以将菇体剪一小段，贴在试管斜面上的培养基表面，让孢子散落在培养基上，使菌丝发芽，然后母种可以获得； 组织分离法。将灭菌后的种菇从接种盒中的菇柄上用手对半解开，或用刀片切开，使菇体形成裂口。在菌盖与菌柄或菌鳃的连接处，用接种刀切一小块菇体，然后纵向切成5mm10mm的小片，用接种针挑出一薄片，插入斜面培养基中央，每支试管接种一小片薄片，待菌丝萌发即得母种； (3)基底内分离法。选用长出蘑菇的木段，切去树皮和表层木质部，用70%酒精消毒，锯成1厘米厚的薄片，放入0.1%汞升水中1-2分钟，消毒后用水对其进行消毒。用水冲洗以去除残留物。然后将小片分成0.5--1厘米宽的条状，插入斜面培养基中央，待菌丝长出后取母种。也可以用接种钩在消毒后长出蘑菇的菌袋中取出颜色纯正、生长旺盛的菌丝，接种在试管斜面上的培养基中央。菌丝体发芽后，即为真菌类。 4、适宜温度培养用上述不同方法分离菌种接种于试管后，应及时将试管移入无菌培养箱或培养室进行培养。在温度下发展。一般孢子排出3-4天后萌发成菌落，10天后菌丝长满管；组织分离接种后2-3天，菌丝在培养基上萌发蔓延生长；菇木分离接种后，7天后菌丝恢复生长。 5、选育与提纯上述方法得到的菌丝不一定是优质的，还需要进行筛选和提纯。

因此，菌丝萌发后，仔细观察，选择菌丝颜色纯正、健壮、生长正常、生长不间断的菌丝，将菌丝连同接种盒中的培养基一起钩好，插入另一试验的培养基中管子。在23--25恒温条件下培养7--10天，待菌丝长满管后，观察选出最好的，即为“母代”母种。 6. 移管扩管母种可移管扩管成“子”母种。使用相同的斜面培养基，每个分枝可扩展到30--50个后代母种。生产中的大部分供应是后代母种。它可以再次扩展。一般每个分枝可扩成20--25个后代和母种，但转管次数不宜超过5次。 7、出菇试验对分选出的母种，还必须进行出菇试验。其方法是：将母种接种在瓶装或袋装的木屑培养基上，根据各种菌种对温度的要求进行适宜的温度培养，直至出菇即可。原种繁殖栽培：将母种置于瓶或袋中的木屑培养基上，经培养形成原种。其技术要求如下。 1、原木屑培养基配方：杂木屑77.5%、麦麸20%、蔗糖1%、石膏粉1.2%、硫酸镁0.3%。 pH值（灭菌前）为6.5--7，含水量调至60%。会上升

述原、辅料混合拌匀，装入750毫升的玻璃菌种瓶内，装料要求下松上紧。瓶口塞紧棉花，再用牛皮纸包住瓶颈与棉塞。然后置于高压灭菌锅内，在147千帕／平方厘米压力下灭菌2--2.5小时。也可进行常压灭菌，在100℃下保持10--11小时，达标后趁热取出，让其冷却。

　　2.接入菌种 待料温降至25℃以下时，在灭菌条件下，将试管种分割成若干决，通过酒精灯火焰迅速接入原种培养基上，每支母种可按4--6瓶原种。

　　3.发菌培养 接种后及时将玻璃菌种瓶移入25℃菌种培养室内进行培养。空间相对湿度控制在70℃以上，避免强光照射。原种培养时间一般菇类需要40--50天，草菇、银耳只需15--20天即可。

　　4.去杂选优 原种培育过程中，要每天进行观察，如发现有杂菌污染的，应立即淘汰。

　　栽培种扩大培育

　　将原种再次扩接在同样的木屑培养基上，在适温条件下培养30--35天即为栽培种（又叫生产种），可用于生产栽培。栽培种可用750毫升菌种专用瓶，由于使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌种袋。袋的规格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等，可根据各种菇耳特性和当地习惯选择使用。培养基灭菌采用常压灭菌灶灭菌，要求灭菌温度达100℃，保持8--10小时，达标后趁热卸袋冷却。待料温降至25℃以下时，在无菌条件下接入选定品种的原种。每瓶原种可扩接成50--60瓶栽培种。菌种培育室要求干净，防强光，室温掌握在23--25℃，并经常检查，发现杂菌污染应及时淘汰，不断选优去劣。当菌丝长满袋，尖端菌丝反转上爬1--3厘米时，为适龄的栽培种。